选不对内参，你的WB结果可能白做了!【小源博士指南】

　　从一个“冤案”说起

　　你有没有遇到过这种情况：WB实验条带清晰漂亮，计算出的目标蛋白表达量差异显著，满心欢喜以为有了新发现，却被审稿人一句“为何选择此内参?请提供内参稳定性证据”问得哑口无言?

　　小源博士告诉你，这很可能不是你的目标蛋白没变化，而是你选的“裁判”——内参，自己“不稳重”了!今天，我们就来彻底搞懂如何为你的实验选择那位最公正的“裁判”。

　　第一部分：内参是什么?为什么它如此重要?

　　· 核心作用：校正误差，确保你看到的蛋白表达变化是真实的，而不是由上样量不均、转膜效率、洗膜时间等操作因素造成的。

　　· 一个比喻：就像称重前必须把电子秤“归零”一样，内参就是WB实验的“归零”标准。用一个变化的内参去校正目标蛋白，结果毫无意义。

　　第二部分：三大“顶流”内参的优缺点大比拼

　　我们为你制作了一份清晰的“内参选手简历”：内参蛋白分子量优点缺点与注意事项适用场景

　　β-actin ~42 kDa 表达量高，几乎在所有真核细胞中普遍存在 “伪稳定”代表!易受细胞增殖、状态、药物处理(如细胞骨架抑制剂)影响;在某些组织(如肌肉、脑)中表达可能不均一。 常规细胞培养模型，快速增殖的细胞系。

　　GAPDH ~36 kDa 信号强，条带漂亮，在胞质蛋白中应用广泛 “代谢敏感型”!任何影响细胞代谢的过程(如缺氧、糖尿病、药物处理)都可能改变其表达。 代谢稳定的正常组织样本;不与代谢通路直接相关的实验。

　　Tubulin ~55 kDa 是细胞骨架的重要组成部分 “动态不稳定”!表达会受到影响微管稳定性的药物(如诺考达唑、紫杉醇)的干扰。 常规组织样本;不与细胞骨架动态调节直接相关的实验。

　　小源博士小结：

　　· β-actin 怕“折腾”(细胞状态变化)。

　　· GAPDH 怕“饿着/撑着”(代谢变化)。

　　· Tubulin 怕“拆家/固家”(细胞骨架扰动)。

　　第三部分：如何选择最适合你的“专属裁判”?

　　黄金法则：你的实验处理，不能影响内参的表达水平!

　　1. 看样本类型

　　· 一般细胞/组织：三大内参均可作为初选，但需通过预实验验证。

　　· 特殊组织：

　　· 肌肉：避免β-actin，推荐 GAPDH 或 COX IV(线粒体内参)。

　　· 脑组织：表达丰富，但不同区域差异大，推荐 β-III Tubulin(神经元特异)。

　　· 脂肪组织：代谢极其活跃，避免GAPDH，推荐 Histone H3(核内参)。

　　2. 看实验处理

　　· 代谢相关研究(如缺氧、糖尿病、糖剥夺/饥饿)：绝对避免 GAPDH!建议使用 β-actin 或 Tubulin，或核内参 Lamin B1。

　　· 药物处理(尤其是化疗药、细胞骨架抑制剂)：避免 Tubulin!建议使用 GAPDH。

　　· 细胞分化/增殖研究：慎用 β-actin!建议使用 GAPDH 或 Tubulin。

　　· 涉及亚细胞结构：

　　· 胞质/总蛋白：GAPDH, β-actin

　　· 细胞核蛋白：Lamin A/C, Lamin B1, Histone H3

　　· 细胞膜蛋白：Na+/K+ ATPase

　　· 线粒体蛋白：COX IV, VDAC1

　　3. 看分子量

　　· 重要原则：内参与目的蛋白的分子量最好相差5kDa以上，以免在转膜或曝光时相互干扰。

　　第四部分：实战指南与避坑总结

　　· 第一步：文献调研

　　· 查阅相似领域、相似实验模型的顶级文献，看别人用什么，这是最快捷的参考。

　　· 第二步：预实验验证(最关键!)

　　· 在正式实验条件下，跑一个“内参筛选”WB。用你处理组和对照组的样本，同时检测2-3种候选内参。理想的内参，在各组间的表达水平应该是一致的。

　　· 第三步：双内参策略

　　· 对于非常重要的研究，或者处于审稿的严格要求，推荐使用两种不同细胞定位的内参(如GAPDH胞质 + Lamin B1核内)，使结果更令人信服。

　　避坑清单：

　　· ❌ 不同组织用同一个内参不加验证。

　　· ❌ 特殊处理实验随意选择常用内参。

　　· ❌ 内参与目的蛋白分子量太接近。

　　· ❌ 不看文献，盲目选择。

　　选择WB内参，没有“一招鲜，吃遍天”的万能选项，只有“具体问题具体分析”的科学态度。记住，一个稳定的内参是WB实验成功的基石。多一份考证，多一份严谨，就能为你的科研成果多一份可信度。

　　博纳创源，助您跑出漂亮的WB，获得可靠的结果!

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