细胞培养中的污染，是每一位研究者都可能遭遇的“噩梦”。一次污染不仅意味着数周工作的付诸东流，更可能导致实验数据失真，甚至威胁实验室生物安全。本指南将系统梳理污染的识别、紧急处理与根本预防策略，助您构建坚实的细胞培养“防火墙”。

　　一、污染类型识别：快速诊断表

　　首先，通过以下特征快速判断污染类型：

　　二、应急处理方案：发现污染后该怎么做?

　　第一步：立即隔离与报告

　　1. 不要移动：立即将污染培养皿/瓶盖好，放入生物安全柜原处。

　　2. 标记：用醒目标记(如红色胶带)注明“污染!”及日期、污染物类型。

　　3. 报告：通知实验室负责人及所有相关人员。

　　第二步：分类处理与消杀

　　根据污染类型和细胞价值决定“抢救”还是“销毁”：

　　重要原则：

　　· 真菌、酵母、支原体污染：强烈建议直接销毁，因其孢子难以根除或检测困难。

　　· 珍贵细胞抢救：仅在污染早期、明确为细菌污染，且细胞价值极高时尝试。成功率有限，且有扩散风险。

　　第三步：彻底清洁

　　1. 安全柜消毒：用75%乙醇擦拭所有内表面，随后用紫外灯照射30分钟以上。

　　2. 培养箱消毒：若污染严重，需彻底清洁污染细胞所在的培养箱隔层。取出所有其他细胞，用含消毒剂的水清洁隔板和水盘，更换无菌水。

　　3. 器械消毒：所有接触过污染培养物的移液器、枪头、废液缸等必须彻底消毒或灭菌。

　　三、根源预防体系：构建“零污染”防线

　　处理是治标，预防才是治本。请从以下环节系统性检查：

　　1. 操作者——第一道防线

　　· 严格无菌意识：进入细胞房前洗手，穿戴实验服、口罩、手套。手套需用75%乙醇频繁消毒。

　　· 规范操作：永远不要在开放培养皿上方经过。瓶盖、管盖开口朝下放置。移液器避免触碰任何非无菌面。

　　· “一细胞一枪头”：严禁用同一支枪头处理不同细胞系，这是防止交叉污染的铁律。

　　2. 环境与设备——基础设施保障

　　· 定期消杀：细胞房、安全柜、培养箱定期用消毒剂清洁和紫外照射。

　　· 培养箱管理：

　　· 使用无菌蒸馏水，每周更换。

　　· 定期(如每季度)用含铜隔板或进行彻底高温消毒(如180℃，过夜)。

　　· 水浴锅：水浴锅是重污染源。必须使用无菌容器盛装培养基，且锅内的水需经常更换并添加抑菌剂。

　　3. 试剂与耗材——物料安全

　　· 来源可靠：血清、培养基、胰酶等关键试剂选择信誉良好的品牌，对新批次进行无菌测试。

　　· 分装使用：大包装试剂分装成小份，避免反复取用导致污染。

　　· 及时更换：PBS、培养基等缓冲液配制后不宜存放过久(建议不超过2周)。

　　4. 细胞本身——源头控制

　　· 常规检测：

　　· 支原体：对新引进细胞株和长期培养的细胞，每1-3个月检测一次。推荐使用灵敏度高的PCR检测试剂盒(如博纳创源支原体快速检测盒，30分钟出结果)。

　　· STR鉴定：对核心实验用细胞，定期进行STR鉴定，确保细胞身份无误，无交叉污染。

　　· 规范保种：

　　· 细胞冻存液确保无菌，早期多冻存几批低代次细胞。

　　· 遵循 “working stock” 原则：从原始库存复苏，传代有限次数后即弃用，避免长期传代导致遗传漂变和污染累积。

　　四、特别关注：支原体污染的防控

　　支原体因其隐形特性危害最大，需特别防范：

　　1. 预防性用药(慎用)：在细胞珍贵且风险高时，可在常规培养基中添加支原体特异性抗生素(如Plasmocin)。但不建议长期使用，以免产生耐药性并掩盖污染。

　　2. 隔离培养：对新引进细胞，务必在独立培养箱或隔离器中培养至少2周，并经检测确认无污染后，再与主库存细胞共存。

　　3. 检测金标准：定期检测是关键。比色法、荧光染色法操作简便，但PCR法灵敏度最高，是主流推荐方法。

　　总结：细胞培养防污染黄金法则

　　1. 意识先行：无菌操作是肌肉记忆，不是知识。

　　2. 定期监测：支原体检测必须纳入常规日程。

　　3. 及时止损：面对污染，果断销毁通常比冒险抢救更明智。

　　4. 保持整洁：清洁的环境是细胞健康的基础。

　　5. 记录溯源：详细记录细胞来源、传代、检测信息，便于问题追溯。

　　最后请记住：在细胞培养中，一次成功的污染预防，其价值远超十次完美的污染处理。

重庆博纳创源生物科技有限公司

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