自从PCR技术问世以来，经历了飞速的发展和技术更新，让所有人都了解到了“核酸检测”的技术。然而，对于初学者来说，PCR技术的名称和原理往往令人感到困惑，傻傻分不清。今天小源博士尝试让你搞懂PCR、qPCR、RT - PCR 、RT-qPCR之间的区别和联系。

1. 普通PCR(就是只做核酸的扩增哦)

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)，即一代PCR，是1985年由美国PE-Cetus公司的科学家Kary Banks Mulis发明的一种可在体外快速扩增特定基因或DNA序列的技术。其原理类似于DNA的天然复制过程，在体外条件下以指数级速度扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。PCR由变性(Denaturation)、退火(Annealing)和延伸(Extension)三个基本反应步骤构成：

①变性：通过加热使模板DNA的双链之间的氢键断裂，双链分开而成为单链。这一步骤通常在94℃至95℃的高温下进行，持续30秒至1分钟，确保双链DNA完全解离。

②退火(复性)：当温度降低时，引物与模板DNA中互补的区域结合成杂交分子。退火温度通常低于引物本身的变性温度，一般在50℃至65℃之间，持续30秒至1分钟，确保引物与模板DNA特异性结合。

③延伸：在DNA聚合酶、dNTPs(四种脱氧核糖核苷三磷酸)和Mg2+等存在下，DNA聚合酶催化引物按照5′→3′方向延伸，合成出与模板DNA链互补的DNA子链。延伸温度通常在70℃至75℃之间，持续时间根据DNA聚合酶的延伸速度和目的扩增片段的长度而定。

第一代PCR主要缺点：容易发生非特异性扩增和假阳性结果;检测耗时长，操作繁琐;只能做定性检测。目前，在临床检测中普通PCR已经成为测序等检测技术的前处理方法，没有太多的独立应用空间。