2-8℃

纤连蛋白(FN)是细胞外基质的一种高分子量（约500-600kDa）糖蛋白，与称为整合素的跨膜受体蛋白结合。纤连蛋白还与其他细胞外基质蛋白结合，如胶原蛋白、纤维蛋白和硫酸肝素蛋白多糖。纤连蛋白以蛋白二聚体的形式存在，由两条几乎相同的多肽链组成，通过一对C端二硫键连接。每个纤连蛋白亚单位的氨基酸分子量为~230-~275kDa，包含三种类型的模块：I型、II型和III型。所有这三种模块都是由两个反平行的β-片组成，形成一个Beta-三明治；然而，I型和II型是由链内二硫键稳定的，而III型模块不包含任何二硫

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物FN，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中FN的浓度。

1. 酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。 2. 样本孵育：每孔分别加入 100μL 不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品（建议样本用通用稀释液最少稀释 1 倍上样，目的是减少基质效应），盖上封板胶纸，37℃避光反应 1 h。孵育结束后，每孔加入 300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动 30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗 3 次。 3. 抗体孵育：每孔加入 100μL 生物素化抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应 1h。孵育结束后，重复步骤 2

计算标准品和样本复孔的平均 OD 值并减去空白孔的 OD 值作为校正值。以浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品 OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

板内变异系数小于 10%，板间变异系数小于 10%。

该试剂盒测定可识别重组小鼠 FN。 其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为 50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。