2-8℃

血小板生成素(TPO)是促进血小板生成最重要的细胞因子。TPO通过结合细 胞表面的TPO受体(TPO-R)，发挥促进血小板生成作用。TPO-R激动剂 (TPO-RA)通过结合并激活TPO-R，有效地刺激血小板生成。TPO是机体内 促进血小板生成最关键的细胞因子。血液循环中的TPO主要由肝细胞合成， 少部分由骨髓基质细胞和肾细胞合成。TPO由2个不同的结构域构成，包括 第1～153位氨基酸残基组成的促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)样结 构域和第154～332位氨基酸残基组成的富含糖基的

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物TPO，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中TPO的浓度。

1. 酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。 2. 样本孵育：每孔分别加入 100μL 不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品（建议样本用通用稀释液最少稀释 1 倍上样，目的是减少基质效应），盖上封板胶纸，37℃避光反应 1 h。孵育结束后，每孔加入 300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动 30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗 3 次。 3. 抗体孵育：每孔加入 100μL 生物素化抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应 1h。孵育结束后，重复步骤 2

计算标准品和样本复孔的平均 OD 值并减去空白孔的 OD 值作为校正值。以浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品 OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

板内变异系数小于 10%，板间变异系数小于 10%。

该试剂盒测定可识别重组小鼠 TPO。 其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为 50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。