2-8℃

烟酰胺磷酸核糖基转移酶是哺乳动物体内合成辅酶Ⅰ（NAD⁺）通路中的核心限速酶，在脂肪组织、肝脏、骨骼肌、脑组织及免疫细胞中均有广泛表达。该酶可催化烟酰胺与 5 - 磷酸核糖焦磷酸发生反应，生成烟酰胺单核苷酸，是机体合成NAD⁺最主要的关键步骤。其通过调控细胞内 NAD⁺含量，深度参与细胞能量代谢、氧化应激平衡、DNA 损伤修复、细胞凋亡及炎症信号传导等多项生理进程。酶活性与表达水平异常波动，会直接扰乱机体代谢稳态，与肥胖、2 型糖尿病、非酒精性脂肪肝、衰老进程以及多种肿瘤疾病的发生发展紧密关联，如今也成为

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物NAMPT，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中NAMPT的浓度。

所有标准品、样品建议复孔检测 1. 酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。 2. 样本孵育：每孔分别加入 100μL 不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品（建议样本用通用稀释液最少稀释 1 倍上样，目的是减少基质效应），盖上封板胶纸，37℃避光反应 1 h。孵育结束后，每孔加入 300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗 3 次。3. 抗体孵育：每孔加入 100μL 生物素化抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃ 重庆博纳创源生

计算标准品和样本复孔的平均 OD 值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品 OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。

回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。 样样本类型 范围（%） 平均均回收率（%） 血清(n=8) 86-102 94 血浆(n=8) 90-106 98 细胞培养上清(n=8) 94-110 102

分别在选取的4份健康小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度NAMPT，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。 稀释比例 回回收率（%） 血清 血浆 细胞培养上清 1:2 范围（%） 92-96 90-98 92-112 1:4 范围（%） 88-104 89-107 104-116 1:8 范围（%） 95-102 92-101 99-115

该试剂盒测定可识别重组小鼠 NAMPT。 其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为 50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。