2-8℃

PINP是一种三聚肽，由两条I型前胶原α1链和一条前胶原α2链组成，其分子量约为35000kDa。PINP是I型胶原的代谢产物，而I型胶原是骨基质中的主要有机成分。因此，PINP在骨形成过程中起着重要作用。前胶原分泌到细胞外后，由特定的切割酶修饰，在C端和N端去除掉一部分肽段形成原胶原。原胶原再彼此缠绕形成胶原纤维，并在此基础上螺旋形成胶原并发挥作用。PINP是监测骨形成的重要标志物，可用于评估成骨细胞的活性、骨代谢的强度以及指导骨代谢异常相关疾病的诊断和治疗。

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物PⅠNP，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中PⅠNP的浓度。

所有标准品、样品建议复孔检测 1.酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。 2.样本孵育：每孔分别加入100μL不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品（建议样本用通用稀释液最少稀释1倍上样，目的是减少基质效应），盖上封板胶纸，37℃避光反应1 h。孵育结束后，每孔加入300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗3次。 3.抗体孵育：每孔加入100μL生物素化抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应1h。孵育结束后，重复步骤2中的

计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%

见说明书

见说明书

该试剂盒测定可识别重组小鼠PⅠNP。 其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。