2-8℃

β-淀粉样蛋白(amyloid-β protein，Aβ)级联学说是AD发病机制的主流学说之一。Aβ聚集形成的老年斑是AD的主要病理特征之一，其主要是由 Aβ1-42异常沉积形成。Aβ1-42多肽可聚集形成寡聚体、纤维等多种不同聚合形态。人体内 Aβ最常见的亚型是 Aβ1-40 和 Aβ1-42。在人脑脊液和血中，Aβ1-40分别比 Aβ1-42的含量水平高 10 倍和 1.5倍，Aβ1-42具有更强的毒性，且更容易聚集，从而形成Aβ 沉淀的核心，引发神经毒性作用 。

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被有Aβ1-42捕获抗体的微孔中，依次加入样本、标准品、生物素标记的检测抗体，HRP 酶结合物，中间经过温育和洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Aβ1-42呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

所有标准品、样品建议复孔检测 1.酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。 2.样本孵育：每孔分别加入100μL不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品（建议样本用通用稀释液最少稀释1倍上样，目的是减少基质效应），盖上封板胶纸，37℃避光反应1 h。孵育结束后，每孔加入300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗3次。 3.抗体孵育：每孔加入100μL生物素化抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应1h。孵育结束后，重复步骤2中的

计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%

该试剂盒测定可识别重组小鼠Aβ1-42。 其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。