2-8℃

人磷酸化 Tau-404 蛋白（p-tau404）是由 MAPT 基因编码的微管相关 Tau 蛋白在丝氨酸 404 位点经 GSK-3β、CDK5 等激酶催化发生病理性过度磷酸化形成的修饰亚型，其异常修饰会导致 Tau 蛋白与微管结合能力显著下降、神经元骨架稳定性破坏与轴突运输障碍，同时增强自身聚集倾向并逐步形成神经原纤维缠结，在阿尔茨海默病进程中与神经变性程度、认知损伤进展高度相关，是脑脊液及外周血中用于 AD 辅助诊断、病情评估与药物疗效监测的重要特异性生物标志物。本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人磷酸化 Tau-404蛋白（p-tau404）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷酸化 Tau-404蛋白（p-tau404）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

所有标准品、样品建议复孔检测 1.酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。 2.样本孵育：每孔分别加入100μL不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品（建议样本用通用稀释液最少稀释1倍上样，目的是减少基质效应），盖上封板胶纸，37℃避光反应1 h。孵育结束后，每孔加入300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗3次。 3.抗体孵育：每孔加入100μL生物素化抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应1h。孵育结束后，重复步骤2中的

计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%

不与其它可溶性结构类似物交叉反应。